标题
更多
首页
更多
  1. 企业文化
  2. 公司荣誉
  3. 加入我们
  4. 联系我们
加入我们
更多
  1. 生物信息分析
  2. 生物研发
  3. 客户经理
  4. 分子实验员
  5. 科研项目负责人
  6. 产品经理
  7. 技术支持

关于我们

武汉爱基百客生物科技有限公司（简称爱基百客），位于武汉高农生物园，办公面积逾3000平方米，是一家专注于表观组学、单细胞时空组学和高通量测序分析服务的新型生物科技企业。


公司旨在为客户提供专业的科研服务，运营至今合作的科研客户近千家，涵盖国内知名科研院所、高校以及相关生物企业，运营至今销售额超1亿元，科研成果曾多次在Cell、Science、Cancer Cell、Plant Cell、Nature Communications、J HEMATOL ONCOL等国际高水平学术期刊发表，受到了客户广泛好评，是国内成长最迅速的多组学科研服务企业之一。

加入我们

NEWS

新闻资讯

详细内容

告别玄学！ChIP-seq新手必看的关键Q&A：样本准备、抗体选择与关键验证

banner.png

ChIP-seq新手必看的关键Q&A

想要ChIP-seq实验数据漂亮，前期的实验准备工作至关重要。很多老师的数据问题，其实往往源于实验初期的细节疏忽。今天我们就把ChIP实验的常见问题一次性讲透，帮您避开那些“坑”！

01

抗体与样本

【1】核心前提：ChIP级别抗体

◆  关键问题：目的蛋白有抗体吗？

成功的ChIP实验，首先必须保证您的研究蛋白拥有同物种、商业化、经过验证的ChIP级别抗体。这是高特异性富集的根本。比如：

图片1.png
图片2.png



◆  如果没有ChIP级别的抗体怎么办？

首选方案：构建标签系统（如Flag、eGFP等）。这样可以利用高度特异性的标签抗体进行富集，成功率更高，是我们强烈推荐的方法。

备选方案：自制抗体。但此方法风险较大，富集效率无法保证，一般不作为优先推荐。

【2】我们能提供哪些抗体？

目前，爱基百客可提供部分常见“硬通货”抗体，包括：

组蛋白修饰抗体： H3K4me1，H3K4me2，H3K4me3，H3K9me1，H3K9me3，H3K9AC，H3K27me3，H3K27AC，H3K36me2，H3K36me3。

标签抗体：Flag和GFP。

阴性对照：IgG抗体

对于其他抗体，需要您根据实验需求自行准备。

【3】样本的“质”与“量”

◆  需要多少生物学重复？

探索性实验（只想找靶基因）：1-2个样本即可。

比较性实验（想看不同处理间的结合差异）：建议设置2-3个生物学重复，以获得更可靠的结果。

◆  样本如何保存与寄送？

务必保证样本足量，并在-80°C、干冰或液氮条件下保存与运输，全程避免反复冻融。

02

前期关键验证：总蛋白WB

【1】为什么必须做WB?

在正式进行ChIP实验前，我们需要通过总蛋白Western Blot（WB）来确认两件事：

·  目标蛋白在您的样本中正常表达。

·  您所使用的抗体在您的样本体系中具有特异性。这一步是验证您抗体有效性的关键，能极大降低后续实验失败的风险。


【2】WB结果异常怎么办？

条带大小与预估不符？

这很常见！可能是由于蛋白质的翻译后修饰（如糖基化、磷酸化），或融合蛋白标签的干扰，导致实际条带偏大。这通常不影响抗体特异性判断。

我们怎么做？我们使用超敏化学发光检测试剂盒（super ECL plus）进行显色，并且不做蛋白纯化。因为WB的目的在于定性验证抗体在总蛋白环境下的结合特异性，这与ChIP在染色质环境下富集的逻辑一致。


03

实验启动：交联与片段化

【1】哪些样本需要您自己交联？

请注意：细菌、细胞、原生质体样本，需要您在寄送前自行完成甲醛交联和甘氨酸终止的步骤。（爱基可为您提供对应的交联试剂和交联方法）

【2】交联试剂小贴士

甘氨酸（2M）配制：7.5g甘氨酸，加水定容至50mL即可。

交联试剂中的PMSF和PIS：PMSF A是结晶状态，使用时将B液加入A液溶解。PIS就是蛋白酶抑制剂，用于保护蛋白。

【3】交联后样本能放多久？

交联后的样本可在-80°C保存约一个月。保存前，请务必在甘氨酸终止后，用PBS充分清洗4-5次，并尽量吸净上清。当然，条件允许下还是建议尽快进行后续实验。

【4】染色质超声片段化

标准条件：使用Bioruptor，默认参数为30秒超声，30秒间隔，12个循环。可根据片段化效果调整循环数。

达标浓度：片段化后的染色质浓度最低需达到20 ng/μL。

若提取不合格：常见原因是样本量不足或样本特殊（如脂肪组织，DNA含量少）。解决方案是补送更多样本。

04

初步判断：富集效果如何评估？

在富集、解交联并纯化DNA后，您可以通过以下几点初步判断实验情况：

IP vs Input：Input的主峰应在100-500bp之间。IP的片段通常会比Input大且分散，这是因为抗体富集会优先结合较大的染色质片段。

建库用量：IP和Input的DNA起始量应在同一水平（通常建议均达到10ng左右）。

浓度底线：纯化后的DNA浓度最好在0.5 ng/μL以上。浓度过低会增加建库失败风险，也可能暗示富集效率不佳。


结语：做好以上每一步，您的ChIP实验就成功了一大半！

下期，我们将带您进入数据分析的世界，解读那些令人眼花缭乱的Peak、Motif和富集分析结果。

市场部小助理微信 6.png

项目咨询

2025.06.17 产品总览-2.jpg

了 解 更 多

{ 往 期 精 彩 回 顾 }

尾巴2.png
关于泽山
更多
  1. 网站首页
  2. 科技服务
  3. 医学检测
  4. 平台实力
  5. 技术支持
  6. 合作案例
  7. 关于我们

         咨询服务热线

027-65522558


（市场部）

18971172815


（行政部）

联系我们


Q Q: 270105245   1511879086   465436937           

邮箱: service@igenebook.com

地址:武汉市东湖高新区高新大道888号高农生物二期3A栋

网址: www.igenebook.com


公司主要提供表观组学技术服务、NGS测序服务、单细胞测序服务等

欢迎咨询！鄂ICP备17016573号-2   技术支持：武汉网站建设

关注我们

二维码

公众号二维码


二维码
客服中心
联系方式
027-65522558
- 线上客服
点击这里给我发消息 点击这里给我发消息 点击这里给我发消息
微信 一对一业务咨询
seo seo