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甲基化修饰检测|说说Dot blot实验那些事

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甲基化修饰检测|说说Dot blot实验那些事

发布日期:2021-03-02 作者: 点击:

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甲基化修饰检测近些年来一直是国自然大热方向,从最开始的5mC的甲基化修饰到后来的6mA修饰,检测手段也日新月异,检测的灵敏度也一直在突破。

目前大家应用最多的检测甲基化的手段主要是通过高通量测序技术,如5mC检测用到的WGBS、RRBS、meDIP-seq等,而6mA检测手段主要是meRIP-seq和miCLIP-seq。当然,还有通过完善算法从而在检测物种基因组或者全长转录本的同时获得这些甲基化修饰信息的三代测序技术。

但是,因为经费的原因,我们不可能拿到任何样本都直接进行下一代测序技术检测。在做进一步的高通量测序实验前,我们希望对获得的研究材料进行初步选择,这个时候,选择筛选方法就较为重要。

目前除了高通量测序技术检测甲基化修饰外,我们还能够通过质谱法进行检测,通过标准品的校正,我们能精确知道样品中的不同的甲基化修饰类型的准确定量,当然了,质谱法实验步骤较为繁琐,也可能会因为提取的杂质影响了最终的结果。

更简便的检测甲基化修饰的方法就是利用甲基化修饰的抗体进行Dot blot实验。整个实验预处理简单,只需要提取质量较好的DNA或者RNA,然后上样、紫外交联、抗体孵育及显色,实验流程如下:

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一般而言,实验操作步骤越短,手动操作步骤越少,结果的真实性就越高。Dot blot实验就满足了这样的条件,整个实验一天就可以完成,并且一次性可以进行多至几十个样品的检测,对于样本的初筛,那真的是有极大的帮助。

当然了,Dot blot是个定性实验,只能对样本的含量进行初步估计,并不能获得准确的含量结果。老师可根据自己的实验需求来选择。

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本文网址:http://www.igenebook.com/news/570.html

关键词:甲基化修饰,dotblot,甲基化

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