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荧光定量pcr

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荧光定量pcr

  • 所属分类:常规分子生物学技术

  • 点击次数:
  • 发布日期:2018/11/20
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详细介绍

荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qPCR) 是快速检测基因表达水平的首选方法。qPCR原理易懂结果难做,费时耗力,爱基百客生物可依据客户需求和实验目的,为您设计切实可行的实验方案,稳定的实验操作,详实的实验报告,帮您完美解决qPCR实验的一切问题!

 

技术原理

通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时监控反应过程,随着 PCR 反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,结合相应的软件对产物进行分析,可以得到一条荧光扩增曲线,计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃,运用该项技术,可以对DNA、RNA样品进行相对、绝对定量和定性分析。

 

技术流程

SYBR Green I 法

荧光染料SYBR Green:嵌入到双链DNA分子后构象发生变化,能够吸收497nm的激发光并发出520nm的荧光;而不掺入DNA双链中的染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

基因表达定量

1. 根据目的基因序列设计特异性的引物和荧光探针。

2. 提取DNA/ RNA,紫外分光光度计检测其完整性和浓度,反转录酶将RNA反转录为cDNA。

3. 引物预实验,筛选出特异性很强的引物。

4. 荧光定量PCR,采用双标准曲线法,结合内参与目的基因的CT值,进行实验结果分析。

5. 实验完成后,提供完整的实验报告结果(含软件分析结果)及引物等相关实验材料。


技术优势

1. 实时监测:通过扩增曲线可以实时动态地观察反应整个过程;

2. 线性范围:从10^2到8次方的广度范围;

3. 重复性好:重复反应的Ct值误差≤ 0.5Ct;

4. 特异性强:特异性引物、优化的反应条件决定了单一的溶解曲线;

5. 高通量反应:9500荧光定量系统一次可进行96个反应。


送样要求

1、细胞(≥10的7次方)、组织(≥300mg)、血液(≥1 ml)、叶片(若干)等样品材料;

2、总RNA量大于5ug或者mRNA大于200ng( 注:OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好);DNA:总DNA大于5ug(OD260/OD280在1.7-1.9之间,完整性好);

3、提供尽可能详细的背景资料:样品来源、目的基因丰度等;

4、引物、探针、标准品(可由客户自己提供,也可由公司直接设计提供);


交付结果

1、实验所需的试剂和仪器说明

2、RNA或DNA提取质量检测电泳图

3、定量检测原始数据(包括扩增曲线、溶解曲线)

4、详细的项目结题报告(包括实验报告和结果分析报告


实验结果展示

表观组学技术服务 

绝对定量—标准品稀释梯度样品扩增曲线


基因表达调控 

目的基因


基因表达定量 

内参基因


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关键词:基因表达定量,表观组学技术服务,基因表达定量

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