植物单细胞测序，原生质体制备哪些你不知道的事儿

单细胞转录组测序技术能够在单细胞分辨率下研究样本的转录组信息，可以完美解决细胞异质问题，能全面真实揭示细胞多样性和复杂性。目前单细胞转录组测序技术大多应用在生物医学领域，随着单细胞转录组测序技术的发展，点燃了单细胞测序技术在植物学领域的研究热潮。

植物单细胞转录组测序从不同层面对细胞发育、细胞功能及基因网络调控等方向进行深入研究探索，打开了我们对植物细胞真实的微观世界认知的大门。目前植物单细胞转录组测序研究主要分为两种类型：一类是对植物原生质体进行RNA测序，另一类是对植物细胞核进行测序。本期我们先给大家分享植物原生质体制备的方法。

为了得到高质量原生质体，爱基百客的小伙伴们进行了大量物种原生质体制备测试，目前已完成水稻、拟南芥、烟草、玉米、青稞、花生、白菜、番茄、杨树等多个物种的叶片、茎和根等部位原生质体制备。

部分测试物种

在单细胞测序技术中，最难的莫过于植物原生质体制备了，为解决这一难题，爱基百客实验室选取了大量的植物样本测试，获得大量高质量原生质体，积累了丰富的原生质体制备经验。本文总结了实验室原生质体制备经验，给大家分享高质量原生质体制备方法。

植物细胞与动物细胞不同，细胞膜外有一层刚性的细胞壁来固定细胞。植物细胞壁不易破坏分解，叶绿体含量太高，碎片杂质占比太高以及容易被染菌等，成为当下植物解离获取原生质体的几大阻碍，如何高效获取高质量原生质体成为当下亟需攻克的实验难题。

植物原生质体制备，目前有两种方法，一是酶解法，二是机械法。酶解法以其得率高、活率好、杂质少等特点成为原生质体制备的首选方法。下面就由我们向大家分享一下植物原生质体解离的方法。

酶解法的关键是酶解消化细胞壁。植物细胞壁的成分主要是纤维素、半纤维素、果胶和蛋白质等。对应的消化细胞壁的酶有纤维素酶R-10、半纤维素酶、果胶酶Y-23、离析酶R-10及崩溃酶等。通过酶解消化细胞壁，释放出植物细胞，从而得到单个完整的原生质体。

1 ）基础酶解液配方：

根：根部组织优先选取新鲜水嫩且状态饱满部位。

茎：茎部组织选取新鲜饱满状态组织，处理时注意剥除外表皮。

1 ）选取材料时尽量丢弃状态不好的组织（失水组织、被挤压变形组织，质地坚硬组织）。

好了，今天的植物原生质体制备方法就分享到这里，想了解更多关于单细胞悬液的制备方法，请继续关注爱基百客微信公众号。